液相色譜日常維護(hù)常識(shí)

液相色譜日常維護(hù)常識(shí)做好日常的儀器維護(hù)保養(yǎng)，養(yǎng)成習(xí)慣，能大的降低故障率，減少維修和停機(jī)成本。從儀器的硬件結(jié)構(gòu)來(lái)講，按照流動(dòng)相經(jīng)過(guò)的順序有以下組成部分：流動(dòng)相溶劑瓶→在線脫氣機(jī)→壓泵→自動(dòng)/手動(dòng)進(jìn)樣器→色譜柱柱溫箱→檢測(cè)器→廢液。下面小探就依照這個(gè)順序來(lái)講儀器的各個(gè)部分在日常使用中需要注意的事項(xiàng)。

、先是溶劑瓶，大好像覺(jué)得溶劑瓶無(wú)非就是幾個(gè)玻璃瓶子，好像根本沒(méi)什么可說(shuō)的。但是，這個(gè)看著簡(jiǎn)單，如果不注意，經(jīng)常會(huì)惹出不少麻煩：

1.1 第個(gè)就是污染：要特別小心盛了水或者緩沖液的瓶子，雖然液相用的水大都經(jīng)過(guò)**處理，不過(guò)，**的生命很頑強(qiáng)，在適當(dāng)?shù)臏囟群凸庹盏那闆r下，他們就會(huì)活躍起來(lái)，如果流動(dòng)相里又加入了磷酸鹽類的添加劑，它們更是如虎添翼。所以，溶劑瓶要做的非常重要的工作就是勤換流動(dòng)相，常換常新。另外關(guān)于防止**滋生的另外個(gè)辦法是在水中加入定濃度的疊氮化鈉，不過(guò)，這個(gè)東西又劇毒，又管制，不是很好弄到，而且風(fēng)險(xiǎn)也很，所以，在我看來(lái)，還是直接換新的流動(dòng)相更方便。

1.2 水相要常換，那么有機(jī)相呢?總不用擔(dān)心**繁殖了吧?沒(méi)錯(cuò)，有機(jī)相完全不用擔(dān)心，不過(guò)如果是裝乙腈的瓶子，要特別小心乙腈的“聚合”，在自然條件下尤其是事宜的光照條件下，乙腈分子就會(huì)和身邊的小伙伴手拉手搞起小團(tuán)體，小團(tuán)體還會(huì)慢慢壯大，直到大到能被眼睛看見(jiàn)了，瓶子里就會(huì)出現(xiàn)些絮狀的沉淀物，這就是乙腈的“聚合”。為了防止聚合的出現(xiàn)，要特別注意裝乙腈好用個(gè)茶色的溶劑瓶，避免陽(yáng)光直射，還有就是換乙腈的時(shí)候定把瓶底剩下的倒掉了換新的。

1.3 說(shuō)完溶液，我們還得注意下瓶子自己，通常瓶子的瓶蓋上會(huì)有幾個(gè)小孔，是供流動(dòng)相管道通過(guò)的，不過(guò)不知道為什么要多開(kāi)幾個(gè)?我見(jiàn)到過(guò)有些使用者會(huì)把這個(gè)小孔堵起來(lái)，這是防止有機(jī)溶劑揮發(fā)減小實(shí)驗(yàn)室污染和防止灰塵進(jìn)入流動(dòng)相瓶子的好辦法，不過(guò)，如果這些個(gè)小孔被徹底堵住，在加上瓶蓋也擰的很緊的情況下，可能會(huì)出現(xiàn)流動(dòng)相吸液不暢的情況，因?yàn)槠孔永飶氐缀痛髿鈮焊袅?為了解決這個(gè)問(wèn)題，大其實(shí)可以咨詢廠商去買種叫做“**瓶蓋”的東西，可以防止揮發(fā)和灰塵，還不用擔(dān)心徹底堵死空氣。

1.4 后個(gè)，是溶劑瓶里的過(guò)濾頭，它的作用是為了防止溶液瓶中的顆粒雜質(zhì)進(jìn)入到儀器的流路系統(tǒng)中，過(guò)濾的孔徑是0.45um，材質(zhì)分為玻璃燒結(jié)石英和不銹鋼的，如果這個(gè)東西臟了的話，也會(huì)造成流動(dòng)相吸液不暢，可以進(jìn)行清洗，玻璃材質(zhì)的通常是用稀硝酸泡，過(guò)夜;不銹鋼材質(zhì)的可以直接超聲清洗。

、接下來(lái)就是脫氣了，脫氣的作用是為了除去流動(dòng)相中溶解的氣體，所以我們就得從氣體開(kāi)始說(shuō)：

2.1 怎么才能讓脫氣機(jī)效的運(yùn)行，好的辦法就是“幫它把”，其實(shí)就是預(yù)先對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行下脫氣了，流動(dòng)相配好之后，現(xiàn)在超聲波清洗機(jī)里脫氣幾分鐘，能大幅度減少脫氣機(jī)的工作負(fù)擔(dān)，因?yàn)槊摎鈾C(jī)的脫氣效率是定的，如果溶液里溶解的氣體超過(guò)了脫氣機(jī)能處理的大值(尤其是在流速的情況下)，氣體就除不干凈了，那時(shí)候就可能在混合的時(shí)候出現(xiàn)氣泡影響儀器壓力波動(dòng)和噪音了。

2.2 脫氣機(jī)除了怕脫不干凈之外，還怕堵，脫氣機(jī)會(huì)堵么?通常不會(huì)，不過(guò)，在經(jīng)過(guò)個(gè)長(zhǎng)假之后，就不好說(shuō)了，堵掉脫氣機(jī)的罪魁禍，還是流動(dòng)相里的微生物，**藻類，如果他們跟著流動(dòng)相停留在脫氣機(jī)里，過(guò)上幾天個(gè)禮拜，很可能就發(fā)展成規(guī)模了，那樣脫氣機(jī)的管道里可能就布滿了“水藻”然后就堵住了，所以，脫氣機(jī)要特別注意的是，在長(zhǎng)時(shí)間不使用儀器的時(shí)候，比如慶節(jié)假期，定要把水相管路中的溶液都替換成甲醇，防止“長(zhǎng)草”，乙腈也是不推薦的，因?yàn)闀?huì)“聚合”。

2.3 堵和漏是對(duì)歡喜冤，液相色譜上能堵的地方，也都有可能漏，脫氣機(jī)也不例外，通常漏液有兩種可能，種是接頭松動(dòng)，只要重新擰緊即可;另外種情況就比較倒霉了，真空腔損壞，這個(gè)就要大修了，造成這種災(zāi)難的通常都是流動(dòng)相流速超過(guò)了脫氣機(jī)能耐受的大流速，通常這種情況是在purge的時(shí)候不小心超過(guò)了大流速，或者是為了方便使用了注射器直接通過(guò)管路吸了流動(dòng)相，要小心操作。

三、跟著流動(dòng)相的足跡，到了壓泵，泵是液相色譜**的部件，通常也是貴的個(gè)部件，要小心使用：

3.1 很多情況下，泵的問(wèn)題反映在壓力上，壓力波動(dòng)又是常見(jiàn)的類問(wèn)題，泵正常的壓力波動(dòng)通常會(huì)在2%以內(nèi)，切平穩(wěn)規(guī)律，不正常的波動(dòng)通常由于氣泡和鹽造成：如果流動(dòng)相中的氣泡沒(méi)有被脫氣機(jī)除掉而到了泵以后，那么就會(huì)造成壓力波動(dòng)，通常我們可以通過(guò)重新purge流路和再次脫氣流動(dòng)相解決;由鹽造成的波動(dòng)主要是因?yàn)榱鲃?dòng)相中加入了濃度較的緩沖鹽，在含鹽流動(dòng)相與有機(jī)相混合的時(shí)候，鹽會(huì)有微小的析出，從而導(dǎo)致壓力異常波動(dòng)，解決這類問(wèn)題可以考慮適當(dāng)?shù)慕档望}濃度，或者使用甲醇取代乙腈有機(jī)相，如果由于種種原因定要用到這種流動(dòng)相，可以考慮在有機(jī)相中加入定比例的水，比如10～20然后適當(dāng)提梯度結(jié)束的終點(diǎn)。

3.2 在泵的維護(hù)里還有個(gè)經(jīng)常會(huì)做的工作就是更換purge閥上的過(guò)濾白頭，其實(shí)難點(diǎn)不在更換這個(gè)白頭本身上，而是在于判斷什么時(shí)候該換，通常判斷的標(biāo)準(zhǔn)是純水5mL/min流速purge的時(shí)候，如果壓力超過(guò)10bar，要考慮更換。更換下來(lái)的白頭，也可以大概判斷儀器的使用狀況：如果白頭是白色的，好像不臟，但就是堵，那有可能是流動(dòng)相中的鹽有析出造成的，這臺(tái)儀器長(zhǎng)期忍受著鹽流動(dòng)相;如果換下來(lái)的是灰黑色的，這是常見(jiàn)的狀況，這是由于泵頭密封墊的磨損造成的，如果出現(xiàn)頻繁更換白頭切更換下來(lái)的都是灰黑色的話，提示儀器密封墊的磨損過(guò)快，可能要考慮升柱塞桿清洗的設(shè)備;如果這個(gè)白頭換下來(lái)的顏色是黃色，綠色等怪異的顏色，那么，儀器該講講衛(wèi)生了，這是流動(dòng)相里的微生物造成的。

3.3 在泵的使用過(guò)程中，有時(shí)會(huì)遇到替換流動(dòng)相的情況，這中替換是指從反相溶劑替換到正相溶劑或者反過(guò)來(lái)替換的過(guò)程，這個(gè)過(guò)程重要的就是流動(dòng)相的兼容性，常用的正反相色譜溶劑是不互溶的，所以在替換中間，定要用異丙醇徹底沖洗系統(tǒng)，保證管路里所有的原有溶劑都被異丙醇替換掉。

四、繼續(xù)走，就到了進(jìn)樣器，進(jìn)樣器分手動(dòng)和自動(dòng)兩大類，兩者雖然工作模式不同，但是使用的要點(diǎn)是基本樣的：

4.1 自動(dòng)進(jìn)樣器常見(jiàn)的問(wèn)題就是臟，用專業(yè)說(shuō)法叫交叉污染，交叉污染產(chǎn)生的原因很直接，樣品殘留在進(jìn)樣針內(nèi)/外表面，并隨在下次進(jìn)樣進(jìn)入色譜系統(tǒng)，要解決交叉污染，也很簡(jiǎn)單，就是洗，自動(dòng)進(jìn)樣器都會(huì)有洗針的功能，如果樣品濃度較或者是吸附性比較強(qiáng)的樣品，定要打開(kāi)此功能，由于儀器設(shè)計(jì)的原理，安捷倫的自動(dòng)進(jìn)樣器無(wú)需清洗進(jìn)樣針內(nèi)壁;手動(dòng)進(jìn)樣器的話，要注意手動(dòng)清洗針的內(nèi)外表面。如果忘記打開(kāi)洗針功能，污染可能已經(jīng)殘留在了針座或流通閥上，這個(gè)時(shí)候要這兩個(gè)部件清洗，需要按照儀器說(shuō)明書上的維護(hù)步驟拆下這兩個(gè)部件進(jìn)行超聲清洗。

4.2 出現(xiàn)在自動(dòng)進(jìn)樣器上的另外個(gè)問(wèn)題是峰面積重現(xiàn)性問(wèn)題。通常這是因?yàn)樽詣?dòng)進(jìn)樣器吸樣品的時(shí)候出現(xiàn)了問(wèn)題，先觀察樣品的液面是不是足夠，以保證進(jìn)樣器可以吸到;如果排除了這個(gè)問(wèn)題，就要看看自動(dòng)進(jìn)樣器的設(shè)置了，對(duì)于些粘度大的樣品，要降低自動(dòng)進(jìn)樣器的吸取速度，這個(gè)可以在儀器設(shè)置中改變;當(dāng)然，還有些更罕見(jiàn)的問(wèn)題：樣品吸附在了樣品瓶上，這個(gè)時(shí)候可以考慮換中材質(zhì)的樣品瓶;還有類情況，是由于樣品瓶的瓶蓋擰的太緊，導(dǎo)致瓶?jī)?nèi)與空氣隔，使得吸樣不準(zhǔn)確，這個(gè)時(shí)候可以考慮適當(dāng)?shù)陌哑可w擰松點(diǎn)。

五、柱溫箱，柱溫箱里有色譜柱，其實(shí)分離是發(fā)生在色譜柱上，柱溫箱本身設(shè)計(jì)到的維護(hù)和使用要點(diǎn)倒是沒(méi)有什么太多可說(shuō)。

小探認(rèn)為柱溫箱其實(shí)是整個(gè)液相色譜系統(tǒng)里皮實(shí)的個(gè)部件，只要保證接頭擰好不漏，好像萬(wàn)年也不會(huì)見(jiàn)到它出問(wèn)題，唯需要注意的是安捷倫的柱溫箱會(huì)有兩個(gè)控溫區(qū)，左邊的區(qū)域上寫著3uL，右邊寫著6uL，表示這兩個(gè)溫區(qū)內(nèi)的體積不樣，通常，我們要使用3uL的那個(gè)，以減小儀器的延遲和擴(kuò)散。

六、檢測(cè)器。檢測(cè)器的種類非常多，而且各有特性，在這里我們還是找大常用的紫外(VWD)/管陣列(DAD)檢測(cè)器來(lái)說(shuō)。這兩類都是紫外類的檢測(cè)器，雖然光路設(shè)計(jì)不同，但是本質(zhì)的原理都是相同的。

6.1 檢測(cè)里有個(gè)非常重要的部件是光源，俗稱燈，燈是個(gè)消耗品，就像里的燈泡樣，用定程度就壞了。但是檢測(cè)器里的燈不能里的電燈泡樣點(diǎn)不亮了再換，因?yàn)榉旁跈z測(cè)器里的燈是對(duì)發(fā)射能量有要求的，旦能量衰減到定程度，就會(huì)出現(xiàn)基線噪音變大，靈敏度降低等系列影響使用的問(wèn)題。通常，燈的壽命是2000h，當(dāng)?shù)竭_(dá)這個(gè)時(shí)限的時(shí)候，我們就要特別關(guān)注燈的能量狀況，可以通過(guò)儀器維護(hù)軟件中自帶的“燈能量測(cè)試”這個(gè)測(cè)試來(lái)判斷，測(cè)試的結(jié)果會(huì)分別評(píng)估低中三個(gè)波長(zhǎng)段的能量，旦某個(gè)波長(zhǎng)段的結(jié)果顯示失敗，就表示要換燈了，通常先出現(xiàn)失敗的都是低波長(zhǎng)段。

6.2 檢測(cè)器里另外的個(gè)重要部件是檢測(cè)池，也叫流通池。很多時(shí)候，大關(guān)心的個(gè)問(wèn)題是檢測(cè)池被堵掉，因?yàn)闄z測(cè)池通常不是很耐壓，所以旦堵掉，很可能造成損壞。不過(guò)還好，檢測(cè)池通常不太容易被堵，原因是幾乎所有的顆粒雜質(zhì)都會(huì)被色譜柱攔下了，所以堵塞檢測(cè)器的東西基本都不是來(lái)自樣品的，很可能是后來(lái)“產(chǎn)生”的，比如含鹽流動(dòng)相殘留在了檢測(cè)池里導(dǎo)致鹽析出，或者是乙腈聚合在檢測(cè)池里，要不就是有些童鞋不太小心，不小心壓住了廢液管線，那就自求多福吧...

6.3 關(guān)于檢測(cè)池，有時(shí)候還會(huì)遇到個(gè)小問(wèn)題，就是檢測(cè)池里的氣泡，氣泡是哪兒來(lái)的，可能是流動(dòng)相中溶解的氣體，也可能是儀器長(zhǎng)時(shí)間不使用檢測(cè)池干了導(dǎo)致的，體現(xiàn)在儀器的表現(xiàn)上，就是基線噪音某明其妙的變大，出現(xiàn)毛刺等等，這個(gè)時(shí)候，可以先觀察系統(tǒng)壓力，如果壓力平穩(wěn)正常，可以判斷這個(gè)波動(dòng)應(yīng)該不是由于泵造成的，那肯能就是由于檢測(cè)池里的氣泡造成的了，對(duì)付這個(gè)氣泡，沒(méi)有太好的辦法，只能用純甲醇慢慢沖，不過(guò)倒是有個(gè)小辦法可以防止，就是在檢測(cè)器的出口出用小段細(xì)內(nèi)徑的PEEK管憋上點(diǎn)壓力可以很大程度的預(yù)防氣泡的產(chǎn)生，但是注意千萬(wàn)不要太長(zhǎng)，有大概3～5厘米的長(zhǎng)度就夠了。

七、后是廢液，其實(shí)廢液本身沒(méi)有任何可說(shuō)，只要注意**就好，定要使用**的溶劑瓶，還要有次容器，我的實(shí)驗(yàn)室就遇到過(guò)次慘痛的教訓(xùn)，廢液滿了溢出了瓶子，腐蝕了塊地板!廢液不能隨意傾倒，后定要收集起來(lái)，交給專門的危險(xiǎn)廢物處理機(jī)構(gòu)，集中進(jìn)行無(wú)害化處理，以保護(hù)我們美好的園哦!